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IncuCyte™ Applications : Phagocytosis


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What Is Phagocytosis?

Phagocytosis는 세포가 외부 물질을 감싸 세포 내부로 들여오는 특수한 형태의 endocytosis입니다. Macrophage, neutrophil 그리고 미성숙된 dendritic cell들은 면역체계에서 주요 phagocytic 세포이며, phagocytosis를 주로 수행 합니다. Phagocytosis는 pathogen에 대한 면역반응을 시작하는 필수적인 요소로써 미생물을 phagocytosis 하고, 죽이며, 항체생성을 하는 등의 면역반응의 핵심 작용원리 입니다.


IncuCyte™ Phagocytosis Assay 소개

IncuCyte system을 사용한 Phagocytosis assay는 사용자의 incubator 내부에서 시간에 따른 phagocytosis변화를 mix-and-read 방식을 사용하여 이미지를 얻고 정량을 자동으로 수행 할 수 있습니다. 이러한 assay방법은 pH sensitive-conjugated probe를 사용하여 bioparticle의 세포내로의 uptake를 실시간으로 시각화 하고 정량 할 수 있으며, 면역 세포의 Gram positive, Gram negative 혹은 yeast-derived pathogen들에 대한 phagocytosis를 관찰하는데 이상적입니다.

IncuCyte ZOOM® live-cell imaging system을 사용한 phagocytosis의 실시간 관찰. IncuCyte ZOOM®을 통해 얻어진 mouse macrophage cell type J774A.1의 IncuCyte® pHrodo® Green E. coli Bioparticles® phagocytosis의 Time-lapse movies. Bioparticles®이 세포내 phagosome의 산성 환경에 노출되며 형광이 시간에 따라 증가하며 나타남. IncuCyte ZOOM® 이미지 분석 도구를 통해 시간 변화에 따른 Green Fluorescence signal을 감지하고 측정할 수 있음. Macrophage의 활발한 활동과 phagocytic cup을 형성하며 일어나는 bioparticle의 uptake를 확인 할 수 있음.



Assay 개념

1.Macrophages (e.g. J774A.1 mouse macrophages) 혹은 다른 phagocytic cells 을 96- 이나 384- well micro-titer plate에 seeding.

2.IncuCyte™ pHrodo® Bioparticles®을 mix-and-read 하여 phagocytosis를 실시간으로 측정 할 수 있음.

3.세포 내 형광의 증가는 phagosome안으로 bioparticle이 들어간 것을 나타냄. IncuCyte™의 자동화된 소프트웨어를 통해 시간에 따른 phagocytosis를 정량 할 수 있음.

Image

IncuCyte™ Phagocytosis Assay 주요 장점

Time-lapse imaging을 통한 phagocytosis의 확인.

자동화된 분석과 정량.

Fixing/quenching/cell lifting이 필요 없는 Mix-and-read방식의 96/384-well format.

높은 민감도, 낮은 background, 낮은 세포 사용량.

IncuCyte™ pHrodo® Bioparticles®을 사용해 장시간 동안의 변화를 실시간으로 확인가능. (0 to >48 hours)

Time-lapse imaging을 통한 phagocytosis의 확인

Image

4시간 동안의 J774A.1 mouse macrophage의 IncuCyte™ pHrodo® Green E. coli Bioparticles® uptake의 시각화된 이미지.

자동화된 분석과 정량

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Fluorescence segmentation을 통한 phagocytosis의 정량. IncuCyte™ software를 사용하여 background fluorescence를 최소화 하고, fluorescence image (pink mask)를 정확하게 segmentation 할 수 있음.

Fixing/quenching/cell lifting이 필요 없는 Mix-and-read방식의 96/384-well format

Image

높은 민감도, 낮은 background, 낮은 세포 사용량

반응의 정도는 세포수나 Bioparticle® 수에 의존적임

Image

Phagocytosis의 정량은 세포 수 와 Bioparticle® 수에 의존적임. J774A.1 mouse macrophage의 IncuCyte™ pHrodo® Green S. aureus Bioparticles® (96-well format)의 phagocytosis.

Image

다양한 조건에서의 phagocytosis signal의 높은 지속성과 낮은 background. ®.

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Cytochalasin D, Latruculin A, Nocodazole에 의한 phagocytosis의 억제. J774A.1 murine macrophage의 inhibitor 존재 하에서의 phagocytosis.


IncuCyte™ Phagocytosis Assay vs. 일반적인 실험법

Phagocytosis의 일반적인 실험법은 주로 하나의 time point이며, (e.g. High Content Analysis (HCA)), cell lifting이 필요 없고 (e.g. flow cytometry) label된 pathogen을 washing/quenching할 필요가 없음 (e.g. fluorescein labelled).

IncuCyte ZOOM® Plate reader Flow cytometry HCA ELISA
Real-time cell visualization 가능 불가능 불가능 불가능 불가능
Integrated analysis 가능 불가능 가능 가능 불가능
Mix-and-read, no wash or quench 가능 불가능 불가능 불가능 불가능
Long-term kinetic measurements 가능 불가능 불가능 불가능 불가능
Flexible choice of effector cells 가능 가능 가능 가능 가능
No fixation/lifting 가능 가능 불가능 불가능 불가능
High sensitivity/low background 가능 불가능 가능 가능 불가능
Low cell number/bioparticle number 가능 불가능 가능 가능 불가능

주문정보

IncuCyte™ pHrodo® Bioparticles®은 IncuCyte ZOOM®에서 자유롭게 사용이 가능하며 phagocytosis의 장시간 관찰을 위해 최적화 되어 있음. (0 to >48 hours).