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IncuCyte™ Applications : Neuronal Co-Culture - Fluorescence


Primary/iPSC-derived neuron/astrocyte cell들을 mixed culture상에서 fluorescent neuronal labelling reagent와 IncuCyte ZOOM® 그리고 NeuroTrack analysis software를 통해 안전한 환경에서 장시간동안 Live Cell의 Neurite length와 branching 을 측정할 수 있습니다.

NeuroTrack™ software module(Cat No 9600-0010)은 IncuCyte ZOOM® Live Cell Imaging System 에서 형광 neurite structure를 kinetic적으로 정량 할 수 있습니다.

NeuroLight™ Red(Cat No 4584)는 사용자의 선택에 따라 장시간동안 neuron에 label이 가능한 mKate2-expression reagent입니다.

NeuroPrime™ Cell Kit(Cat No 4585)은, 96 well 에서 바로 사용이 가능한 rat forebrain neuron, rat astrocyte, NeuroLight™ Red Kit 입니다.

사용자의 선택에 따라 NeuroPrime™ rForebrain Neuron(Cat No 4587)과 NeuroPrime™ rAstrocyte(Cat No 4586)을 사용하여 co-culture system을 셋업 할 수 있습니다.


Key Features

Co-culture상에서의 Neurite dynamics

Live cell fluorescent probe와 NeuroTrack™ software 를 사용하면 support cell이 존재하는 상태에서의 neuron을 시각화 하고(e.g. astrocytes) 시간에 따른 neuronal metric을 (neurite length, branch points, cell body clusters)자동으로 측정.

Neuronal label에 특화된 제품군 및 Kit

NeuroLight Red™ neuron labeling reagent와 간단한 실험법을 사용하여 장기간동안 안정적인 red fluorescent protein(mKate2) signal을 neuron상에서 관찰. NeuroPrime™ Cell Kit은 rat forebrain/rat astrocyte 을 사용하여 96-well assay가 가능. 이는 neurotoxicity 및 기존에 알려진 neural network를 연구하는데 이상적인 방법.

대부분의neuronal cell type에 적용 가능

Neuronal cell line, primar와 rat cortical, rat DRG, hIPSC iCell Neurons 및 iDOPA neuron 등의stem cell-derived culture등에 적합함이 확인 됨.

높은 정량성과 간단한 사용

NeuroTrack™ software를 사용하여 완전 자동화된 이미지의 촬영과 분석이 가능. Visualize kinetic plot을 실시간으로 microplate view를 통해 시각화 할 수 있음. Treatment에 대한 생물학적인 효과를 이미지와 time-lapse movie를 통해 추가적인 확인이 가능.


Example Data

NeuroTrack software를 사용한 자동화된 분석

NeuroTrack software는 형광 이미지를 분석하여 전체 neurite의 길이, branch points의 수와 cell body cluster의 수를 얻어냄. 좌측: co-culture 상에서 NeuroLight Red lentivirus reagent 로 label된 primary rat forebrain neuron. 중간: NeuroTrack neurite segmentation mask(yellow)가 겹쳐진 이미지. Branch point가 흰색 점으로 표시됨. 우측: NeuroTrack cell body cluster segmentation mask(blue)가 겹쳐진 이미지.

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NeuroLight Red – 장시간동안 cell에 영향을 주지 않고 정량이 가능한 형광 label

NeuroPrime Cell Kit과 NeuroTrack software module을 사용한 rat astrocyte와 primary rat forebrain neuron의 co-culture 상에서의 Neurite outgrowth. 좌측 상단: co-culture상에서 NeuroLight Red lentivirus reagent로 label된 Primary rat forebrain neuron을 plating 후 20x로 7일 후 촬영한 이미지. 우측 상단: 좌측상단 이미지에 해당하는 HD-phase contrast image. 좌측 하단: neurite에 대한 자동화된 image segmentation(yellow). 우측 하단: cell body cluster에 대한 자동화된 image segmentation(blue).

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co-culture assay를 위한 NeuroLight Red neuronal labeling protocol

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Assay performance

neurite length는 Red로 label되었고 NeuroTrack software를 통해 12일 동안 측정됨. 좌측: 96 well plate의 전체 well에서의 시간에 따른 neurite length의 변화. 우측: 수일간에 걸친 assay 안정성; 하나의 control column(n=8)에 대한 평균 neurite length는 13개 plate에서 288시간동안 5개월의 기간 동안 측정됨. 직선은 neurite length에 대한 전반적인 평균이며, 점선은 평균값에서 ±20% 의 변화를 보임.

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정량적인 pharmacology

NeuroPrime Cell Kit(Cat No 4585)과 NeuroTrack software module(Cat No 9600-0010)을 사용한 neurite outgrowth에 대한 정량적인 pharmacology. 좌측 상단: DIV9에 glutamate에 대한 neurite length의 농도 의존적인 감소. 우측 상단: glutamate에 대한 농도 의존 곡선과 287시간대의 neurite length 데이터를 사용해 생성된 IC50값. 좌측 하단: DIV3에 paclitaxel 처리 시의 neurite length의 농도 의존곡선. 우측 하단: paclitaxel의 농도에 따른 263시간대의 neurite length데이터를 사용해 얻어진 농도 의존 곡선과 IC50.

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NeuroLight Red는 다양한neuronal cell type에 사용가능

Primary rat hippocampal과 cortical neuron(Global Stem)은 DIV5와 DIV7에 rat astrocyte와 co-culture 됨. iPSC neurons(iCells; Cellular Dynamics International)은 iCell Astrocytes(Cellular Dynamics International)와 co-culture됨. Rat dorsal root ganglion(DRG: Lonza) neuron은 NeuroLight Red 처리7일 후를 보여줌.

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