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IncuCyte™ Applications : Cytotoxicity


cell membrane 비 투과성 fluorescent cell health dye(. YOYO-1)와 IncuCyte ZOOM®을 사용하여 Cytotoxicity를 시각화 및 측정 할 수 있습니다. cell proliferation(phase)이나 cell counting(fluorescent nuclear label) 측정을 같이 사용하여 cytostatic과 cytotoxic 현상을 관찰 할 수 있습니다.


Key Features

wash 과정이 없는, mix and read assay

Cell에 영향을 주지 않는 세포 비침습성 dye(e.g. YOYO-1®, CellTox Green®)를 cell culture media에 직접 첨가. Cell membrane이 비정상적인 cell의 DNA는 형광으로 label됨.

cytotoxic과 cytostatic effect를 구분

Confluence metrics(phase)나 cell counts(NucLight nuclear labelling reagents)와 결합하여 single plate(vessel)상에서의 cell proliferation와 cytotoxicity를 정량.

Fully kinetic measurements

Cytotoxicity의 full time-course과정을 fluorescence objects(dying cells)의 발현을 통해 관찰.

96-, 384-well format에 적용 가능

IncuCyte에서 각 시간대별 최대 576 이나 2,304 well을 사용하여 다수의 compound를 다양한 농도로 테스트 하고 분석 할 수 있음.

Automated image acquisition and processing

IncuCyte software algorithm을 사용하여 이미지를 얻고 분석 할 수 있음. microplate view 방식으로 kinetic polt을 시각화 할 수 있음. 데이터를 Cell death와 Proliferation EC50/IC50 값을 구하기 위해서 타 software로 export 할 수 있음.

Validate data with images and movies

cell death를 image와 time-lapse movie로 시각화 하여 cell morphology 변화 정보를 얻고 특징을 확인할 수 있음.


Example Data

Cytostatic과 cytotoxic profile의 구분. nuclear restricted RFP를 발현하는 HT-1080 human fibrosarcoma cell(HT-1080 NucLight Red)에 대한 cytotoxicity(YOYO-1 dead cell object count: 좌측 상단)와 cell proliferation(Nuclight Red nuclear count: 우측 상단) 96-well kinetic assay. 각각의 panel의 가로축은 time(0-3 days), 세로축은 object(cell) count(0-600 per field of view). 데이터는 매 2시간마다 얻어짐. Staurosporine (Col 1-6), Cycloheximide(Col 7-12) 의 농도에 대한 반응곡선은 상단(최고농도)에서 하단(최저농도)으로 처리됨(row H는 control). 두개의 compound 모두 proliferation을 억제 하지만, Staurosporine만 cell death를 유발함.

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상단 패널: Staurosporine에 의한 HT-1080 NucLight Red cell death(좌측)와 proliferation(우측) Time-course. 하단 패널: HT-1080 NucLight Red cell death(YOYO-1 Object Count per mm2)와 cell proliferation(Nuclear Count per mm2)의 Staurosporine(좌측)과 Cycloheximide(우측)의 농도에 따른 반응곡선을 green과 red fluorescent time-course 데이터를 통해 확인. 평균 AUC 값은 EC50와 IC50 값을 구하는데 사용됨.

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