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IncuCyte™ Applications : Cell Proliferation - Cell Count


EssenBio Science 사의 NucLight labelling reagent를 사용하여 실제 cell number(nuclear count)를 실시간으로 Incubator 내부에서 측정 가능합니다. growth rate의 계산과 doubling time 측정이 가능하며, morphology를 관찰하고, co-culture를 관찰 할 수 있습니다.


Key Features

Proliferation을 직접적으로 관찰

NucLight RFP/GFP cell labelling reagents나 pre-labelled cell lines을 IncuCyte ZOOM®과 함께 사용하면 nuclear counting을 통해 cell number를 counting하고 정량 할 수 있음.

완전히 kinetic적인 측정

Cell growth rate와 doubling time을 결정하기 위해 Cell number를 시간에 따라 확인 할 수 있음.

96-과 384-well format 가능

Time point 별로 IncuCyte에서 576나 2,304 well에 대한 데이터를 얻을 수 있음.

자동화된 이미지 acquisition과 processing

fully-integrated software algorithm을 사용해 이미지를 얻고 분석 가능. kinetic plot을 micro-plate view 방식으로 시각화 할 수 있음. EC50/IC50 값을 계산하거나 보고서 작성을 위해 손쉽게 Data Export가 가능함.

이미지와 동영상을 통해 결과의 validation이 가능

성장 특성과 cell morphology의 변화를 이미지와 동영상을 통해 시각화 하여 얻어 낼 수 있음.

Co-Culture Assay제작

Red와 green cell label을 사용하면 다른 cell의 존재 하에서의 cell proliferation 의 정량이 가능합니다.


Example Data

좌측: 16개의 compound 조건에서 nuclear restricted GFP(HT-1080 NucLight Green)를 발현하는 HT-1080 human fibrosarcoma cell의 proliferation을 384-well microplate 상에서 관찰. Column 23과 24는 vehicle(0.5% DMSO)과 Cycloheximide(3 mM) control. 농도 의존적인 cell proliferation의 저해가 확인됨. (e.g. row J, row M, row O), 낮은 효과 및 효과 없음이 확인됨. (e.g. row A, row P). 가로축: time(0-72h), 세로축: fluorescent object count per well(0-3800). 우측 : HT-1080 NucLight Green cell에 대한 표준 proliferation 억제 물질 농도 의존 곡선. 가로축: -log M [compound], 세로축: 최대 nuclear count (per mm2). 각각의 time point에서의 데이터는 동일한 조건의 두개의 well로부터 평균값을 하나의 384 well plate로부터 얻어냄.

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다양한 compound로 처리된 HT-1080 NucLight Green의 ‘blended’ phase contrast/fluorescence image. 이미지는 compound 처리 후 24시간 후에 얻어짐. Control 대비하여 각각의 처리에 따른 cell number의 변화와 cell morphology의 변화를 확인 가능함.

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Cycloheximide에 의한 HT-1080 cell proliferation의 저해. 좌측 상단: Proliferation time-course의 Microplate view. Cycloheximide의 농도 의존 곡선은 상단(고농도)에서 하단(저농도)로 처리됨. 가로축: time(0-72h), 세로축: green object(cell) count(0-1870 objects). 우측 상단: HT-1080 NucLight Green cell의 Cycloheximide에 의한 time course Proliferation 정량. 좌측 하단: proliferation에 대한 Cycloheximide 의 영향에 의한 Log 데이터. 우측 하단: Cycloheximide에 대한 농도의존 곡선. 가로축: Rate constant(K value), 세로축: log Cycloheximide concentration(M). 측정된 pIC50 값은 6.7이며 곡선 기울기는 1.0.

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