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IncuCyte™ Applications : Apoptosis


IncuCyte ZOOM®과 caspase-3/7 fluorescence reagent를 사용하여 Apoptotic cell death를 시각화 및 측정 할 수 있습니다. 또한 cell proliferation(phase)이나 cell counting(fluorescent nuclear label)방법을 사용하여 Cell growth를 동시에 측정 할 수 있습니다.


Key Features

Wash 과정 없이 mix and read방식으로 kinetic caspase assay 가능

Caspase-3/7(Essen BioScience) reagent(Cat No 4440)를 직접 cell culture media에 첨가. Cell 내에 존재하는 활성화된 Caspase-3/7은 reagent를 쪼개 DNA-binding fluorescent probe를 활성화. 이 Probe가 DNA와 결합하여 형광을 통해 Apoptotic cell을 확인 가능.

cell proliferation 측정과 동시에 사용가능

confluence metrics(phase)나 NucLight nuclear labelling reagents(cell count)방식과 함께 사용하면 Single cell에서 cell proliferation과 apoptosis를 동시에 확인 가능.

완전한 kinetic measurements

fluorescent object의 발생을 Counting하여 내/외부의 자극에 의해 유발되는 apoptosis를 full time course로 관찰.

96- 과 384-well format 적용 가능

IncuCyte에서 각 시간대별 최대 576 이나 2,304 well을 사용하여 다수의 compound를 다양한 농도로 테스트 하고 분석 할 수 있음.

자동화된 image acquisition & processing

IncuCyte software algorithm을 사용하여 이미지를 얻고 분석 할 수 있음. microplate view 방식으로 kinetic plot을 시각화 할 수 있음. 데이터를 Apoptosis와 Proliferation의 EC50/IC50 값을 구하기 위해서 타 software로 export 할 수 있음.

이미지와 movie를 사용하여 validation 가능

apoptotic cell death를 image와 time-lapse movie로 시각화 하여 정보를 얻고 특징을 확인할 수 있음.


Example Data

MDA-MB-231human breast adenocarcinoma cell에서의 Taxol(33nM)의 효과 확인. Caspase-3/7 reagent(Essen BioScience)가 존재하는 상태에서 IncuCyte를 사용하여 Time Lapse 이미지 촬영. Caspase-3/7 fluorescent green signal과 동반하여 특징적인 cell shrinkage, membrane blebbing과 perturbance 관찰 가능.

Image

좌측 상단: Essen BioScience Caspase-3/7 reagent의 작용원리 모식도. Cycloheximide 농도의 증가에 따른 HT-1080 human fibrosarcoma cell의 Time-course 이미지. Caspase-3/7 activation(우측 상단) 과 cell proliferation(좌측 하단)은 positive caspase-3/7(green) object 개수와 cell confluence(phase)측정을 통해 동일 well 상에서 관찰됨. 우측 하단: Area under curve(AUC)분석. Cycloheximide 농도에 따른 HT-1080 cell death(Caspase-3/7 Object Count per mm2)와 cell proliferation(Confluence, %)를 Green fluorescent와 Phase confluence time course 데이터를 통해 확인. 평균 AUC 값은 EC50/IC50 값은 얻는데 사용됨.

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